用于層析的填料(DEAE-纖維素52)如何再生,再利用
問: 請問各位,用于層析的填料(DEAE-纖維素52)如何再生,再利用,怎么處理保存再利用呢??我現在實驗正進行到這步,不知道怎么處理,好急,請高手給些意見!謝謝!
另外,在我層析前用酸堿處理DEAE-纖維素52時,水洗很久都不到合適的PH值,就酸堿處理就花了一天時間,請那位高手能告訴我詳細的處理過程,讓我檢查下自己是否哪里有問題。非常感謝!!
答: DEAE52預處理方案:
取0.5M NaOH 500 ml (加入 NaCl 使濃度為0.5M NaCl), 稱DEAE-纖維素DE-52 30g, 灑入上述液體中,混勻.室溫放置2h, 換0.5M NaOH 一次.
然后抽濾洗滌,, 0.5M NaOH → H2O至 pH 6.0 →0.5M HCl → H2O至 pH 6.0→0.5M NaOH→H2O至 pH 6.0。
注:這是我做實驗時的記錄,可以根據你所需要用的DEAE52的量適當放大,縮小。
DEAE-52再生方法:
1.一般而言,只需用高鹽洗至,電導(為電阻的倒數)達到1.0左右即可,約0.35M的NaCl。
2.提供一個較高效的再生柱子的方法。0.1M Na3PO4-0.2%Triton X-100,用于蛋白較雜,柱子污染較嚴重時。
問: 還想問問用酸(堿)處理后水洗我要洗好久才能吸到中性,就酸堿處理一次就要6個小時的樣子,這是正常的嗎?
答: 0.1%疊氮鈉緩沖液的疊氮鈉緩沖液,中的緩沖液一般緩沖液均可,一般用層析時的初始緩沖液,我們用的是0.0M 的Tris-HCl從未出現過問題。已用此方法保存了柱子一年,其間一直在使用。
柱子再生的方法有兩類,1.是將整個柱子洗下來,然后再表面活性劑,NaCl,酸堿處理,這種處理方法比較費時,當然也比較徹底,現在這種方法用的比較少,除非柱子污染比較嚴重;現在通常的方法是2.在柱子用后直接處理,常用的洗滌液中可含有:NaCl、6M或8M 脲、有機溶劑(如醇類等)、表面活性劑等。
我給你的第二種方法應該是一種比較強的再生洗滌液,這個方法也是我最近查文獻查的,因為我近來的這個實驗中發現高鹽洗滌不徹底,所以查到了這個方法,洗滌后要用大量的水將其中的表面活性劑去除,然后再用上柱起始緩沖液平衡。
布氏漏斗應該不貴,關鍵是還得有真空泵才行,想辦法借一個真空泵吧,好多實驗室都有。
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