微生物檢測(cè)無(wú)菌操作有哪些要求？
?? 微生物實(shí)驗(yàn)室 ??
微生物分析的實(shí)驗(yàn)室需遵循“防污染、防危害、分區(qū)域”原則，契合檢驗(yàn)方法要求及生物安全等級(jí)。地面、墻面材料和臺(tái)面應(yīng)便于清潔消毒，潔凈區(qū)需配備獨(dú)立空氣凈化系統(tǒng)，控制溫濕度、壓力等參數(shù)，空氣過(guò)濾系統(tǒng)定期維護(hù)并記錄。
實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)劃分潔凈區(qū)、生物安全控制區(qū)及輔助區(qū)域（陽(yáng)性菌實(shí)驗(yàn)室、培養(yǎng)室、培養(yǎng)基制備區(qū)等），基因擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室需分隔試劑配制、核酸提取等專用區(qū)域并明確標(biāo)識(shí)。
微生物實(shí)驗(yàn)室需對(duì)人員/物品進(jìn)出嚴(yán)格控制，僅限授權(quán)人員進(jìn)入，進(jìn)入人員還需掌握更衣流程及潔凈度要求，確保不影響實(shí)驗(yàn)室的潔凈環(huán)境。
微生物實(shí)驗(yàn)室配置的儀器設(shè)備應(yīng)能滿足微生物檢驗(yàn)工作的需要，關(guān)鍵儀器設(shè)備應(yīng)定期進(jìn)行檢定校準(zhǔn)；高壓蒸汽滅菌器按國(guó)家有關(guān)規(guī)定管理并定期檢驗(yàn)，陽(yáng)性高壓蒸汽滅菌器應(yīng)獨(dú)立配備。
?? 環(huán)境監(jiān)測(cè) ??
需要定期對(duì)微生物潔凈室（區(qū)）及隔離系統(tǒng)進(jìn)行環(huán)境監(jiān)測(cè)，監(jiān)測(cè)項(xiàng)目應(yīng)包括空氣懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物及溫濕度、壓差等物理參數(shù)，如果監(jiān)測(cè)結(jié)果不滿足區(qū)域控制要求，需要進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整后達(dá)到規(guī)定要求。
?? 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備 ??
1、開(kāi)啟潔凈區(qū)空氣凈化系統(tǒng)、超凈工作臺(tái)風(fēng)機(jī)和紫外線燈，進(jìn)行自凈，使環(huán)境達(dá)到相應(yīng)潔凈度。
2、根據(jù)滅菌程序?qū)?shí)驗(yàn)物品正確實(shí)施滅菌。
3、如需無(wú)菌取樣，應(yīng)采用無(wú)菌操作技術(shù)在具有無(wú)菌條件的特定區(qū)域中進(jìn)行，取樣的任何消毒過(guò)程不應(yīng)影響樣品中微生物的檢出。
4、如使用隔離系統(tǒng)，將樣品和實(shí)驗(yàn)物品等預(yù)清潔后放入艙體內(nèi)，開(kāi)啟滅菌程序。
?? 實(shí)驗(yàn)過(guò)程 ??
1、人和物應(yīng)按照規(guī)定的程序進(jìn)入潔凈區(qū)，控制進(jìn)入人數(shù)并盡量減少人員走動(dòng)。
2、雙手消毒后戴一次性無(wú)菌手套，在超凈工作臺(tái)中央無(wú)菌區(qū)域內(nèi)進(jìn)行操作。
3、保持工作臺(tái)面整潔，必要物品可暫時(shí)放置，其他實(shí)驗(yàn)物品用完后及時(shí)移出，保證氣體流通；
4、在酒精燈火焰旁的無(wú)菌區(qū)操作，動(dòng)作輕緩，幅度宜小，減少不必要的動(dòng)作；
5、用消毒劑擦拭直接接觸樣品的包裝表面進(jìn)行消毒后方可打開(kāi)包裝；
6、加稀釋液時(shí)，不應(yīng)觸碰樣品瓶（袋）口，進(jìn)行10倍遞增稀釋時(shí)，刻度吸管移至下一級(jí)稀釋管的內(nèi)壁近液面處（勿接觸液面），緩慢放出樣液，更換新的刻度吸管進(jìn)行吹打混勻（不應(yīng)過(guò)于劇烈），也可置混勻器上混勻；
7、一支吸管只能吸取一種溶液，不應(yīng)交叉使用；加液時(shí)如吸管接觸瓶口、瓶外壁，應(yīng)立即棄用，更換另一支無(wú)菌吸管繼續(xù)實(shí)驗(yàn)；
8、稀釋液和培養(yǎng)基溫度不應(yīng)超過(guò)45℃；固體培養(yǎng)基滅菌后只可再融化1次，融化后在45℃～50℃保溫時(shí)間不應(yīng)超過(guò)8小時(shí)；傾倒培養(yǎng)基時(shí)瓶口不應(yīng)接觸平皿，每皿（直徑90mm）注入的培養(yǎng)基量以15mL～20mL為宜；
9、開(kāi)啟任何一次性無(wú)菌耗材都應(yīng)在超凈工作臺(tái)內(nèi)完成，避免與任何物品觸碰。
10、每次實(shí)驗(yàn)均應(yīng)設(shè)置陰性對(duì)照，陽(yáng)性菌操作應(yīng)在生物安全控制區(qū)完成，不應(yīng)與待檢樣品共用操作空間；染菌的吸管、玻片等器材應(yīng)及時(shí)置于盛有消毒劑的消毒桶內(nèi)消毒，待實(shí)驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行高壓蒸汽滅菌（121℃，30min）處理。
11、實(shí)驗(yàn)結(jié)束，將實(shí)驗(yàn)物品帶出潔凈區(qū)，對(duì)工作臺(tái)面和地面進(jìn)行消毒，自凈后關(guān)閉空氣凈化系統(tǒng)。
