復(fù)制叉式復(fù)制
大腸桿菌等原核生物的環(huán)狀染色體 DNA 復(fù)制時(shí),首先在 DNA 的復(fù)制起點(diǎn)上解螺旋。 DnaB 蛋白結(jié)合在復(fù)制起點(diǎn)處兩個(gè)解旋了的單鏈上,分別形成兩個(gè)前導(dǎo)鏈 (leading strand) 的引物 (primer) ,當(dāng)前導(dǎo)鏈朝正反兩個(gè)方向同時(shí)延伸時(shí), DnaB 蛋白朝延伸方向作逆向移動(dòng),陸續(xù)形成后隨鏈 (laggingstrand) 的引物。這是 DNA 雙向復(fù)制的方式。在復(fù)制啟動(dòng)時(shí),尚未解開(kāi)螺旋的親代雙鏈 DNA 同新合成的兩條子代雙鏈 DNA 的交界處,就稱為復(fù)制叉 (replication fork) 。兩個(gè)靠得很近的復(fù)制叉之間形成的空間稱為“復(fù)制泡” (replication bubblo) 。真核生物線狀雙鏈 DNA 分子復(fù)制時(shí)也是先形成復(fù)制叉,只是復(fù)制起點(diǎn)不止一個(gè)。復(fù)制開(kāi)始時(shí), DNA 解旋酶把 DNA 雙鏈分子解開(kāi)成兩股單鏈,形成了 Y 形的復(fù)制叉。復(fù)制叉是不對(duì)稱的,即一條子鏈?zhǔn)沁B續(xù)合成的,這是前導(dǎo)鏈,其合成稍稍領(lǐng)先于另一條不連續(xù)合成的后隨鏈。由于 DNA 子鏈的合成是從 5 ,端到 3 ’端方向進(jìn)行的,所以前導(dǎo)鏈只需在復(fù)制起點(diǎn)上有一個(gè)引物,一旦形成復(fù)制叉后, DNA 聚合酶就可沿著親鏈模板不斷地加上新的核苷酸,從而合成一條新的連續(xù)的子鏈。同樣道理,由于 DNA 子鏈的合成是從 5 ,朝 3 ,方向進(jìn)行,所以一定要等前導(dǎo)鏈開(kāi)始合成而將后隨鏈的合成模板暴露出來(lái)以后,后隨鏈的合成才得以進(jìn)行。此時(shí),先由 DNA 引物酶合成與后隨鏈親鏈的堿基互補(bǔ)的、長(zhǎng)約 10 個(gè)核苷酸的 RNA 引物,在 DNA 聚合酶作用下沿著后隨鏈模板合成 DNA ,一直延伸到前一個(gè) DNA 片段 5 ’端上 RNA 引物為止。這樣合成的是一系列不連續(xù)的長(zhǎng)約 200 個(gè)核苷酸的片段,這被稱為岡崎片段 (okazaki fragment) 。專一識(shí)別 DNA / RNA 雙鏈體中的 RNA 鏈的 DNA 修復(fù)酶,切除 RNA 引物,代之以由 DNA 聚合酶合成的 DNA 小片段。最后由 DNA 連接酶把岡崎片段連接成一條連續(xù)的 DNA 單鏈。
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