費(fèi)林試劑法測(cè)定總糖
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
掌握用費(fèi)林試劑法測(cè)定總糖的原理和方法。
二、實(shí)驗(yàn)原理
還原糖是指含有自由醛基(如：葡萄糖)或酮基(如：果糖)的單糖和某些二糖(如：乳糖、麥芽糖)。在堿性溶液中，還原糖能將金屬離子(Cu2+，Hg2+，Ag+等)還原，而糖本身被氧化成各種羧酸類化合物。
該特性常用于糖的定性和定量測(cè)定。本實(shí)驗(yàn)采用費(fèi)林試劑熱滴定法，費(fèi)林試劑是氧化劑，由甲乙兩種溶液組成。甲液含硫酸酮和次甲基藍(lán)(氧化還原指示劑)；乙液含氫氧化鈉、酒石酸鉀鈉和亞鐵氰化鉀。當(dāng)甲、乙兩溶液混合時(shí)，硫酸銅與氫氧化鈉反應(yīng)生成天藍(lán)色的氫氧化銅沉淀。在堿性溶液中，酒石酸鉀鈉與沉淀的氫氧化銅作用形成可溶性的絡(luò)合物。
費(fèi)林(Feiling)試劑是含有Cu2+的堿性溶液，能使具有自由基或酮基的糖氧化，其本身則被還原成紅色或黃色的Cu2O(由于沉淀速度不同，形成的顆粒大小不同，顆粒大的為紅色，小的為黃色)。
三、儀器和試劑
儀器
酸式滴定管(25mL)、吸量管(5，10mL)、容量瓶(100mL)、電爐、錐形瓶(250mL)、滴管、點(diǎn)滴板。
試劑
1. 費(fèi)林試劑(定量)
費(fèi)林甲液 稱取15g 硫酸銅和0.05g 次甲基蘭，溶于1000mL 水中；
費(fèi)林乙液 稱取50g 酒石酸鉀鈉，54g 氫氧化鈉和4g 亞鐵氰化鉀溶于1000mL 水中。
2. 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液 稱取葡萄糖(預(yù)先在105℃ 烘干，恒重)1g，用少量蒸餾水溶解后加入8mL 濃鹽酸(防止微生物 生長(zhǎng))，再用蒸餾水定容至1000mL。
3. 6mol/L 鹽酸溶液
4. 10%氫氧化鈉
5. 85% 乙醇
6. 酚酞指示劑
7. 碘試劑(碘化鉀—碘溶液）
四、操作步驟
(一)空白測(cè)定
準(zhǔn)確吸取費(fèi)林甲乙液各5mL 和蒸餾水5mL 放入250mL 的錐形瓶中，再用滴定管加入定量的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液，混勻后放在石棉網(wǎng)上加熱，應(yīng)使瓶?jī)?nèi)溶液在2min 內(nèi)達(dá)到沸騰，以每滴4～5s 的速度由滴定管滴入葡萄糖液直至藍(lán)色消失為止。沸騰前加入的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液量與沸騰后滴定時(shí)所用的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液量的總和，就是測(cè)定空白時(shí)耗用的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液mL 數(shù)(V1)。
全部滴定過程必須在沸騰狀態(tài)下快速進(jìn)行，一般應(yīng)在3min 內(nèi)完成。因此，除控制滴定速度外，滴定前需加入一部分標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液。加入該液的數(shù)量，應(yīng)在正式滴定前的預(yù)備滴定試驗(yàn)時(shí)確定，同時(shí)練習(xí)掌握操作條件。
(二)還原糖的測(cè)定
準(zhǔn)確稱取山芋粉4g 放入250mL 錐形瓶中，加入85%乙醇50mL，在50℃恒溫水浴內(nèi)浸提30min，并經(jīng)常攪拌。過濾，收集濾液。濾渣按上法再用85%乙醇處理二次，過濾，用50℃的85%乙醇洗滌殘?jiān)：喜⑸鲜鰹V液和洗滌液，蒸去乙醇，移入100mL 容量瓶?jī)?nèi)，用蒸餾水定容至刻度，即為測(cè)定還原糖的樣品液。
應(yīng)用乙醇(80%~85%)提取待測(cè)樣品的還原糖，因?yàn)橛盟?甚至用冰水)或稀乙醇(10%)提取時(shí)，可溶性淀粉均能和還原糖一起溶解，從而導(dǎo)致測(cè)出的還原糖含量偏高，而淀粉含量偏低。若待測(cè)樣品內(nèi)無可溶性淀粉(遇碘呈藍(lán)色)，則可用水提取還原糖。采用85%乙醇提取是假定樣品是干燥的，如果樣品含水量高，則乙醇濃度需相應(yīng)提高。
準(zhǔn)確吸取樣品液5mL 放在250mL 錐形瓶中，加入費(fèi)林甲液、乙液各5mL，在電爐上加熱至沸，然后按空白測(cè)定的滴定速度滴入標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液直至藍(lán)色消失，記下滴定的mL 數(shù)(V2)。氧化作用與溫度、煮沸時(shí)間、溶液濃度和酸堿度等條件有密切關(guān)系，除準(zhǔn)確量取試劑外，還應(yīng)嚴(yán)格操作。在滴定樣品時(shí)，應(yīng)與空白測(cè)定的操作條件盡可能一致。
(三)總糖的測(cè)定
準(zhǔn)確稱取山芋粉1g，加入6mol/L 鹽酸10mL，蒸餾水15mL，混勻。沸水浴加熱30min 后，取出幾滴水解液用碘化鉀—碘溶液檢查水解是否完全，若已水解完全，則不呈現(xiàn)藍(lán)色。冷卻后加入酚酞指示劑1滴，用10%氫氧化鈉中和至溶液呈微紅色，過濾，濾液定容至100mL，準(zhǔn)確吸取該溶液10mL，移入100mL 容量瓶?jī)?nèi)并定容至刻度，即為測(cè)定總糖的樣品液。
準(zhǔn)確吸取樣品量5mL 放于250mL 錐形瓶?jī)?nèi)，加入費(fèi)林甲液、乙液各5mL，混勻，然后按測(cè)定還原糖同樣操作進(jìn)行滴定，記入耗用標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖的mL 數(shù)(V2)。
五、計(jì)算
V1——為測(cè)定空白時(shí)耗用的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖體積(mL)。
V2—為測(cè)定還原糖或總糖時(shí)耗用的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖的體積(mL)。
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