粘性末端連接
如果目的序列兩端有與 載體 上相同的限制性核酸內(nèi)切酶位點，則同一限制酶切開產(chǎn)生的粘末端，在降低溫度退火時，能重新互補(bǔ)結(jié)合，在DNA連接酶催化下，目的序列就與 載體 DNA鏈相連接。
不同的限制性內(nèi)切酶切，如果產(chǎn)生的DNA的粘末端相同，也同樣可用此法連接，如識別6bp序列的BamHⅠ和識別4bp序列的Sau3aⅠ切割DNA后都產(chǎn)生5’突出粘性末端GATC，可以互補(bǔ)結(jié)合連接。
如果在連接的兩個DNA片段沒有能互補(bǔ)的粘性末端，可用末湍核苷酸轉(zhuǎn)移酶催化脫氨單核苷酸添加DNA的3’末端，例如一般DNA3’端加上polyG，另一股DNA加上polyC，這樣人工在DNA兩端做出能互補(bǔ)的共核苷酸多聚物粘性末端，退炎后能結(jié)合連接（圖20-6），這樣方法稱為同聚物加尾法。
對平末端的DNA，也可先連上人工設(shè)計合成的脫氧寡核苷酸雙鏈接頭，使DNA末端產(chǎn)生新的限制內(nèi)切酶位點，經(jīng)內(nèi)切酶割后，即可按粘性末端相連。
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