琥珀酸脫氫酶及丙二酸的抑制作用
一、實驗目的
1.掌握測定琥珀酸脫氫酶活性的簡易方法及其原理。
2.了解丙二酸對琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制作用。
二、實驗原理
琥珀酸脫氫酶是三羧酸循環中一個重要的酶，測定細胞中有無琥珀酸脫氫酶活性可以初步鑒定三羧酸循環途徑是否存在。
琥珀酸脫氫酶能使琥珀酸脫氫生成延胡素酸，并將脫下的氫交給受氫體。用甲烯藍(美藍)作受氫體時，甲烯藍被還原生成無色的甲烯白(美白)，其反應如下：
丙二酸是琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制刑。細菌量越多或脫氫酶活性越高甲烯藍脫色所需時間越短。因此，甲烯藍脫色所需時間的倒數可用來表示酶的活性或細菌生長的情況。
根據上述原理，可用甲烯藍脫色法來測定脫氫酶或細菌含量。例如，在評定牛奶的等級時，可用此法測定牛奶中的雜菌含量，脫色越快，含菌量越高，牛奶質量越差。由于甲烯藍容易被空氣中的氧所氧化，所以實驗需在無氧情況下進行。常用Thnbe ro(鄧氏)管抽去空氣進行反應，也可簡化為，用液體石臘(或凍結瓊脂)封閉反應液，制造無氧環境，這樣可不用抽真空設備。
三、 儀器 、原料和試劑
儀器
試管、恒溫水浴鍋、研缽。
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