離心技術(shù)
離心技術(shù)是將含有微小顆粒的懸浮液置于離心轉(zhuǎn)子中,利用轉(zhuǎn)子繞軸旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的離心力將微小顆粒按密度或質(zhì)量的差異將其分離的方法。
一、基本原理
1、重力場(chǎng)中的沉降
將含有微粒的懸浮液靜置一段時(shí)間,液體中的微粒受重力作用,使得較重的微粒下沉與液體分開,即為”重力沉降”。微粒在介質(zhì)中的沉降受到介質(zhì)的浮力、介質(zhì)阻力和擴(kuò)散現(xiàn)象的影響。
2、相對(duì)離心力
離心技術(shù)是根據(jù)微小顆粒在離心力場(chǎng)中的行為建立并發(fā)展起來的。離心機(jī)轉(zhuǎn)子能夠以穩(wěn)定的角速度作圓周運(yùn)動(dòng),從而產(chǎn)生一個(gè)強(qiáng)大的輻射向外的離心力場(chǎng),它賦予處于其中的任何物體一個(gè)離心加速度。使之受到一個(gè)向外的離心力。離心機(jī)所產(chǎn)生的離心力場(chǎng) G,可由下公式計(jì)算
G=ω2r ω—轉(zhuǎn)子的角速度 r—旋轉(zhuǎn)半徑(物質(zhì)質(zhì)點(diǎn)所處位置與旋轉(zhuǎn)中心的距離)
離心力場(chǎng)常用相對(duì)離心力RCF(Relative Centrifugal Force,RCF)來表示。相對(duì)離心力的大小用相當(dāng)于地心引力(重力加速度,g)的倍數(shù)來表示,即:
RCF=ω2r/g×g=(2πn)2r/602g×g=1.119×10-5×n2r×g
N—轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速,rpm/min g—重力加速度,980.6cm/s2
3、沉降速度
沉降速度是指在強(qiáng)大的離心力作用下,單位時(shí)間內(nèi)物質(zhì)顆粒沿半徑方向運(yùn)動(dòng)的距離。
被分離物質(zhì)顆粒(或大分子)在離心管中與轉(zhuǎn)子一同旋轉(zhuǎn)時(shí)承受著沿半徑方向的直接離心力Fc作用。 Fc=Mω2r, M—被分離物質(zhì)顆粒的質(zhì)量。
其沉降速度v為;v=6.092×10-4×D2(ρ-ρm)n2r/ηm
D—顆粒直徑,cm;ρ和ρm分別為顆粒和介質(zhì)的密度,g/cm3;ηm—介質(zhì)粘度,單位帕?秒Pa?s
由此看出,顆粒沉降速度與三個(gè)方面因素有關(guān):
a、顆粒本身性質(zhì):沉降速度與顆粒直徑和密度成正比。密度相同時(shí)大顆粒比小顆粒沉降快;大小相同時(shí),密度大的比密度小的沉降快。
b、介質(zhì)性質(zhì):沉降速度與介質(zhì)粘度、密度成反比,介質(zhì)粘度、密度大則顆粒沉降慢。
c、離心條件;顆粒沉降速度與離心時(shí)轉(zhuǎn)速和旋轉(zhuǎn)半徑成正比。如其它條件不變,沉降速度隨著r的增大而增大,在進(jìn)行速度區(qū)帶離心時(shí),r對(duì)沉降速度的這種影響不利于達(dá)到滿意的分離效果,所以需要在沿半徑方向上相應(yīng)的增加介質(zhì)的密度和粘度以克服r的增加造成的影響。
4、沉降系數(shù)
沉降系數(shù)是指在單位離心力場(chǎng)作用下,顆粒沉降的速度以S表示:S=v/ω2r
細(xì)胞及細(xì)胞的各種組成成分的沉降系數(shù)有很大的差異,我們可用生物樣品的沉降系數(shù)的差異采用離心技術(shù)將它們彼此分離開來。
細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)某些沉降系數(shù)范圍和離心條件
名稱 沉降系數(shù),S 相對(duì)離心力,g 離心轉(zhuǎn)速,r/min
細(xì)胞 >107<200 <1500
細(xì)胞核 4×106—107 600——800 3000
線粒體 2×104—7×104 7000 7000
微粒體 102—1.5×104 1×105 30000
DNA 102 2×105 40000
RNA 4—50 4×105 60000
蛋白質(zhì) 2—25 >4×105 >60000
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