薄層層析(TLC)實(shí)驗(yàn)操作步驟
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薄層層析（TLC）技術(shù)
薄層色譜(TLC )是一種非常有用的跟蹤反應(yīng)的手段，還可以用于柱色譜分離中合適溶劑的選擇。
薄層色譜常用的固定相有氧化鋁或硅膠，它們是極性很大(標(biāo)準(zhǔn))或者是非極性的(反相)。
流動(dòng)相則是一種極性待選的溶劑。在5.301中以及大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)中，都將使用標(biāo)準(zhǔn)硅膠板。
將溶液中的反應(yīng)混合物點(diǎn)在薄板上，然后利用毛細(xì)作用使溶劑(或混合溶劑)沿板向上移動(dòng)進(jìn)行展開(kāi)。
根據(jù)混合物中組分的極性，不同化合物將會(huì)在薄板上移動(dòng)不同的距離。
極性強(qiáng)的化合物會(huì)“粘”在極性的硅膠上，在薄板上移動(dòng)的距離比較短。
而非極性的物質(zhì)將會(huì)在流動(dòng)的溶劑相中保留較長(zhǎng)的時(shí)間從而在板上移動(dòng)較大的距離?；衔镆苿?dòng)的距離大小用Rf值來(lái)表達(dá)。
這是一個(gè)位于0～1之間的數(shù)值，它的定義為：化合物距離基線(最先點(diǎn)樣時(shí)已經(jīng)確定)的距離除以溶劑的前鋒距離基線的距離。
薄層色譜(TLC)實(shí)驗(yàn)步驟：
1) 切割薄板。 通常，買來(lái)的硅膠板都是方形的玻璃板，必需用鉆石頭玻璃刀按照模板的形狀進(jìn)行切割。
在切割玻璃之前，用尺子和鉛筆在薄板的硅膠面上輕輕地標(biāo)出基線的位置(注意不要損壞硅膠面)。
借助鋒利的玻璃切割刀和一把引導(dǎo)尺，你便可方便地進(jìn)行玻璃切割。當(dāng)整塊玻璃被切割后，你就可以進(jìn)一步將其分成若干獨(dú)立的小塊了。
(開(kāi)始的時(shí)候，也許你會(huì)感到有一些難度，但經(jīng)過(guò)一些訓(xùn)練以后，你便會(huì)熟練地掌握該項(xiàng)技術(shù)。)
2) 選取合適的溶劑體系。 化合物在薄板上移動(dòng)距離的多少取決于所選取的溶劑不同。
在戊烷和己烷等非極性溶劑中，大多數(shù)極性物質(zhì)不會(huì)移動(dòng)，但是非極性化合物會(huì)在薄板上移動(dòng)一定距離。
相反，極性溶劑通常會(huì)將非極性的化合物推到溶劑的前段而將極性化合物推離基線。
一個(gè)好的溶劑體系應(yīng)該使混合物中所有的化合物都離開(kāi)基線，但并不使所有化合物都到達(dá)溶劑前端， Rf值最好在0.15~0.85之間。
雖然這個(gè)條件不一定都能滿足，但這應(yīng)該作為薄層色譜分析的目標(biāo)(在柱色譜中，合適的溶劑應(yīng)該滿足Rf在0.2~0.3之間)。
那么，應(yīng)該選取哪些溶劑呢?一些標(biāo)準(zhǔn)溶劑和他們的相對(duì)極性(從LLP中摘錄)列于如下：
強(qiáng)極性溶劑： 甲醇〉乙醇〉異丙醇
中等極性溶劑： 乙氰〉乙酸乙酯〉氯仿〉二氯甲烷〉乙醚〉甲苯
非極性溶劑： 環(huán)己烷，石油醚，己烷，戊烷
常用混合溶劑：
乙酸乙酯/己烷：常用濃度0~30%。但有時(shí)較難在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上完全除去溶劑。
乙醚/戊烷體系：濃度為0~40%的比較常用。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上非常容易除去。
乙醇/己烷或戊烷：對(duì)強(qiáng)極性化合物5~30%比較合適。
二氯甲烷/己烷或戊烷：5~30%，當(dāng)其他混合溶劑失敗時(shí)可以考慮使用。
3) 將1~2mL選定的溶劑體系倒入展開(kāi)池中，在展開(kāi)池中放置一大塊濾紙 。
4) 將化合物在標(biāo)記過(guò)的基線處進(jìn)行點(diǎn)樣。 我們用的點(diǎn)樣器是買來(lái)的，此外，點(diǎn)樣器也可從加熱過(guò)的Pasteur吸管上拔下(你可以參照UROP)。在跟蹤反應(yīng)進(jìn)行時(shí)，一定要點(diǎn)上起始反應(yīng)物、反應(yīng)混合物以及兩者的混合物。
5) 展開(kāi)： 讓溶劑向上展開(kāi)約90%的薄板長(zhǎng)度。
6) 從展開(kāi)池中取出薄板并且馬上用鉛筆標(biāo)注出溶劑到達(dá)的前沿位置。 根據(jù)這個(gè)算Rf數(shù)值。
7) 讓薄板上的溶劑揮發(fā)掉。
8) 用非破壞性技術(shù)觀察薄板。 最好的非破壞性方法就是用紫外燈進(jìn)行觀察。將薄板放在紫外燈下，用鉛筆標(biāo)出所有有紫外活性的點(diǎn)。盡管在5.301中不用這種方法，但我們將采用另一常用的無(wú)損方法--用碘染色法。
9) 用破壞性方式觀測(cè)薄板。 當(dāng)化合物沒(méi)有紫外活性的時(shí)候，只能采用這種方法。在5.301中，提供了很多非常有用的染色劑。使用染色劑時(shí)，將干燥的薄板用鑷子夾起并放入染色劑中，確保從基線到溶劑前沿都被浸沒(méi)。用紙巾擦干薄板的背面。將薄板放在加熱板上觀察斑點(diǎn)的變化。在斑點(diǎn)變得可見(jiàn)而且背景顏色未能遮蓋住斑點(diǎn)之前，將薄板從加熱板上取下。
10) 根據(jù)初始薄層色譜結(jié)果修改溶劑體系的選擇。 如果想讓Rf變得更大一些，可使溶劑體系極性更強(qiáng)些;如果想讓Rf變小，就應(yīng)該使溶劑體系的極性減小些。如果在薄板上點(diǎn)樣變成了條紋狀而不是一個(gè)圓圈狀，那么你的樣品濃度可能太高了。稀釋樣品后再進(jìn)行一次薄板層析，如果還是不能奏效，就應(yīng)該考慮換一種溶劑體系。
11) 做好TLC標(biāo)記，計(jì)算每個(gè)斑點(diǎn)的Rf值，并且在筆記本中畫出圖樣
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