分子生物學(xué)常用試劑的配制
1．LB(Luria-Bertani)培養(yǎng)液、平板的配制
配制每升LB培養(yǎng)液，應(yīng)在950ml去離子水中加入：
細菌培養(yǎng)用酵母提取物（bacto-yeastextract）5g
細菌培養(yǎng)用胰化蛋白胨（bacto-tryptone）10g
NaCl10g
搖動容器直至溶質(zhì)完全溶解，用5mol/LNaOH(約0.2ml)調(diào)節(jié)pH值至7.0，加入去離子水至總體積為1L，在151bf/in2(1.034×105Pa)高壓下蒸汽滅菌20min。
L瓊脂平板的配制：
先按上述配方配制液體培養(yǎng)基，臨高壓滅菌前加入瓊脂糖15g/L，同法高壓蒸汽滅菌20min。從高壓滅菌器取出培養(yǎng)基時應(yīng)輕輕旋動以使熔解的瓊脂糖能均勻分布于整個培養(yǎng)基溶液中，應(yīng)使培養(yǎng)基降溫至50℃時，加入抗生素等不耐熱的物質(zhì)。為避免產(chǎn)生氣泡，混勻培養(yǎng)基時應(yīng)采取旋動的方式，然后可直接從燒瓶中傾出培養(yǎng)基鋪制平板。90mm直徑的培養(yǎng)皿約需30－50ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)基完全凝結(jié)后，應(yīng)倒置平皿并貯存于4℃?zhèn)溆谩?br style="box-sizing: border-box;"/>
2．瓊脂糖凝膠的配制
根據(jù)所需凝膠的濃度秤取瓊脂糖，加入相應(yīng)電泳緩沖液中，用微波爐加熱煮沸至瓊脂糖完全溶解，加入適量E混勻，適當(dāng)冷卻后傾入凝膠鑄槽中，插入梳子，凝膠厚度不超過梳孔，如有氣泡產(chǎn)生則用玻璃棒驅(qū)除，不能過早拔除梳子，應(yīng)待凝膠完全凝結(jié)后才能拔除梳子。
3．P1、P2、P3的配制
P1的配制：在800ml去離子水中溶入Tri堿6.06g，Na2EDTA 2H2O3.72g，用HCl調(diào)整H至8.0，用去離子水調(diào)整容積至1升，每升P1內(nèi)加入RNaseA100mg。
P2的配制：在950ml去離子水中溶入aOH8.0g，20％SD50ml，調(diào)整容積至1升。
P3的配制：在500ml去離子水中溶入醋酸鉀294.5g，用冰醋酸調(diào)整H值至5.5，用去離子水調(diào)整容積至1升。
4．常用緩沖液：
TE
pH7.4
10mmol/LTris-HCl(pH7.4)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
pH7.6
10mmol/LTris-HCl(pH7.6)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
pH8.0
10mmol/LTris-HCl(pH8.0)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
STE(亦稱TEN)
0.1mmol/LaCl
10mmol/LTris-HCl(pH8.0)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
STET
0.1mmol/LaCl
10mmol/LTris-HCl(pH8.0)
1mmol/LEDTA(pH8.0)
5%TritoX-100
TNT
10mmol/LTris-HCl(pH8.0)
150mmol/LaCl
0.05%Twee20
電泳緩沖液
Tris-乙酸（TAE）：50×濃貯存液（每升）：242gTri堿
5. 7.1ml冰乙酸
100ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)
使用時再稀釋50倍。
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